Blue-White Screen & Transformation

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https://www.youtube.com/watch?v=u5H06cjO91M

Resumen

TLDRLa vidéo présente le processus de transformation de l'ADN, où un plasmide contenant un gène d'intérêt est introduit dans des bactéries, comme E. coli. Elle explique la technique de dépistage "blue white screen", qui permet de détecter les bactéries recombinantes en fonction de la couleur des colonies sur un milieu contenant de l'x-gal. Les colonies blanches indiquent la présence d'ADN recombinant, tandis que les colonies bleues indiquent son absence. Le plasmide utilisé contient un gène de résistance à l'ampicilline, permettant de sélectionner les bactéries transformées.

Para llevar

  • 🔬 La transformation de l'ADN introduit un plasmide dans des bactéries.
  • 🧬 Le plasmide contient un gène d'intérêt et un gène de résistance à l'ampicilline.
  • 🟦 Les colonies bleues indiquent l'absence d'ADN recombinant.
  • ⚪ Les colonies blanches indiquent la présence d'ADN recombinant.
  • 🧪 L'enzyme bêta-galactosidase est essentielle pour la détection des colonies.
  • 📊 Le blue white screen est une méthode de dépistage courante en biotechnologie.
  • ✂️ Les enzymes de restriction sont utilisées pour insérer le gène d'intérêt dans le plasmide.
  • 🌱 Seules les bactéries contenant le plasmide survivent sur un milieu avec ampicilline.
  • 🔍 Cette technique permet de sélectionner efficacement les bactéries transformées.
  • 📅 La vidéo fournit une introduction utile à la technique de blue white screen.

Cronología

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    Dans cet épisode, nous avons introduit le concept de transformation de l'ADN, qui est le processus par lequel un plasmide contenant un gène d'intérêt est introduit dans une cellule, souvent une bactérie comme E. coli. Nous avons expliqué que la transformation permet la transcription et la traduction du gène d'intérêt en protéines. Ensuite, nous avons abordé la technique de dépistage appelée 'blue white screen', utilisée pour détecter les bactéries recombinantes et vérifier le succès de la transformation. Nous avons décrit comment la présence ou l'absence de l'enzyme bêta-galactosidase, formée par deux sous-unités, détermine la couleur des colonies sur un milieu contenant X-gal. Les colonies bleues indiquent une enzyme fonctionnelle, tandis que les blanches signalent l'absence de celle-ci, ce qui signifie que le plasmide contient l'ADN recombinant. Enfin, nous avons montré comment utiliser cette technique pour sélectionner les colonies blanches, qui contiennent le plasmide avec l'insertion d'ADN souhaitée.

Mapa mental

Vídeo de preguntas y respuestas

  • Qu'est-ce que la transformation de l'ADN ?

    La transformation de l'ADN est le processus par lequel un plasmide contenant un gène d'intérêt est introduit dans une cellule, souvent une bactérie.

  • Quel est le rôle de l'enzyme bêta-galactosidase dans le blue white screen ?

    L'enzyme bêta-galactosidase est formée de deux sous-unités, dont une provient du plasmide. Sa présence ou absence détermine la couleur des colonies sur le milieu.

  • Comment les colonies blanches et bleues sont-elles formées ?

    Les colonies blanches indiquent la présence d'ADN recombinant, tandis que les colonies bleues indiquent l'absence d'ADN recombinant.

  • Quel est le rôle de l'ampicilline dans ce processus ?

    L'ampicilline est un antibiotique qui permet de sélectionner uniquement les bactéries contenant le plasmide, car seules celles-ci peuvent survivre en sa présence.

  • Comment le plasmide est-il conçu pour inclure un gène d'intérêt ?

    Le plasmide est conçu avec un site de restriction qui permet d'insérer un gène d'intérêt, ce qui rend l'ADN recombinant.

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Subtítulos
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Desplazamiento automático:
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    hello and welcome to today's episode
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    about the blue white screen we will
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    explain what it is and how it is
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    performed let's start off with some
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    basic things like transformation what is
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    transformation DNA transformation is the
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    process during which a plasmid or vector
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    carrying a specific gene of interest is
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    transformed into another cell often
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    bacteria we can see here we have a
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    plasmid which is a circular bit of DNA
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    and in orange we can see the gene of
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    interest inserted in the plasmid the
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    most common use bacteria for this
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    process is a coli what happens if we
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    transform a plasmid into material like
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    e.coli we can insert this plasmid via
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    heat shock for example and then the gene
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    of interest is transcribed and
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    translated into proteins this was just a
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    little short explanation of
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    transformation and we need this to
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    explain the blue white screen the blue
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    white screen is a screening technique
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    which is one of the most common used
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    techniques for detecting recombinant
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    bacteria it is used to check whether the
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    transformation process was successful or
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    not we are going to start off with a
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    normal bacterium so here we see the
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    genomic DNA on the right and the plasmid
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    DNA which was inserted we are each
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    shocked for example on the left and for
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    the blue white screen we used the fact
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    that one of the proteins or enzymes is
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    built up from two different types of sub
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    proteins one is usually transcribed and
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    translated from the genomic DNA of the e
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    coli and the other one the alpha unit is
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    only transcribed from the plasmid and
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    only together they form the active
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    enzyme called better galactosidase here
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    on the right we can see a prepared plate
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    this plate contains x-gal and on ex-girl
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    plates we can see blue dots and these
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    represent colonies of bacteria which
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    have this enzyme called beta
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    galactosidase if there is
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    functional beta-galactosidase we see
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    only white colonies on the x-gal medium
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    this is just the background information
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    to understand the upcoming design of the
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    plasmid we have a plasmid here and in
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    orange you can see the ampicillin
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    resistance we usually work with the
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    ampicillin resistance course ampicillin
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    is an antibiotic and with the gene that
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    allows the bacteria to live on
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    ampicillin medium we can know okay these
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    bacteria they contain the plasmid and
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    this is the first thing we should know
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    the yellow sequence on the plasmid
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    represents the lac set gene and this
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    locked set gene will produce functional
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    beta galactosidase later these are the
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    two main components of our plasmid but
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    now we have to make sure that we also
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    detect the restriction side this plasmid
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    is designed so that we have a
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    restriction site at the end but in the
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    sequence of the lacks a gene in
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    biotechnology we can use restriction
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    enzymes to cut specifically at the
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    restriction sites here you can see
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    during the cups where part of the lock
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    set gene will go missing the DNA insert
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    is designed so that it can easily fit
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    into the restricted site once the DNA
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    insert is inside the plasmid we call it
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    recombinant DNA and as we said earlier
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    now the sequence of the lacks a gene is
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    now not completely present this was due
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    to a part that went missing during the
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    restriction so we conclude we have our
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    plasmid now this carries a ampicillin
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    resistance and we have Noel accept gene
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    anymore and we have the inserted DNA and
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    we can call this plasmid recombinant DNA
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    we remember from the introduction that
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    if we place bacteria that have a
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    functional lacks a gene a functional
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    better galactosidase on x-gal plates we
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    should expect blue dots but since the
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    lac set gene is
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    missing here what we will see is wide
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    colonies in the laboratory in in real
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    life a screen would rather look like
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    this we have a plate
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    this contains x-gal and a piece Ilyn
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    making sure that only bacteria with a
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    plasmid will survive and then we will
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    find blue dots and we will find white
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    dots and these dots represent the
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    colonies of bacteria white colony means
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    we have successfully made recombinant
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    DNA a blue colony on the other hand
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    means there is no recombinant DNA and
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    now we can selectively use the white
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    colonies and place them on a different
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    plate and work with them since we know
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    our DNA insert should be contained on
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    the plasmid thank you very much for
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    watching I hope this little introduction
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    to the blue white screen was helpful for
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    you if it was please give this video a
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    like and I hope we will see each other
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    next time
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